雙縮脲試劑檢測(cè)蛋白質(zhì)原理什么顏色(雙縮脲試劑檢測(cè)蛋白質(zhì)原理)
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雙縮脲是由兩分子尿素縮合而成的化合物,將尿素加熱到180度,則兩分子尿素縮合成一分子雙縮脲,并放出一分子氨。雙縮脲在堿性溶液中能與硫酸銅反應(yīng)產(chǎn)生紅紫色絡(luò)合物,此反應(yīng)稱為雙縮脲反應(yīng)。蛋白質(zhì)分子中含有很多和雙縮脲結(jié)構(gòu)相似的肽鍵,因此也能起雙縮脲反應(yīng),形成紅紫色絡(luò)合物。
雙縮脲試劑檢測(cè)蛋白質(zhì)原理
雙縮脲(NH2CONHCONH2)是兩個(gè)分子脲經(jīng)180℃左右加熱,放出一個(gè)分子氨后得到的產(chǎn)物。在強(qiáng)堿性溶液中,雙縮脲與二價(jià)銅離子形成紫色絡(luò)合物,稱為雙縮脲反應(yīng)。凡具有兩個(gè)酰胺基或兩個(gè)直接連接的肽鍵,或能夠以一個(gè)中間碳原子相連的肽鍵,這類化合物都有雙縮脲反應(yīng)。
紫色絡(luò)合物顏色的深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比,而與蛋白質(zhì)分子量及氨基酸成分無關(guān),故可用來測(cè)定蛋白質(zhì)含量。干擾這一測(cè)定的物質(zhì)主要有:硫酸銨、Tris緩沖液和某些氨基酸等。
此法的優(yōu)點(diǎn)是較快速,不同的蛋白質(zhì)產(chǎn)生顏色的深淺相近,以及干擾物質(zhì)少。主要的缺點(diǎn)是靈敏度差,不適合微量蛋白的測(cè)定。
雙縮脲法測(cè)定蛋白質(zhì)的優(yōu)缺點(diǎn)
優(yōu)點(diǎn):雙縮脲法測(cè)定蛋白質(zhì)的測(cè)定范圍是1-10mg蛋白質(zhì),操作簡(jiǎn)單、快捷。既適合手工操作,又適合自動(dòng)化分析,重復(fù)性好、線性關(guān)系好,雙縮脲試劑可以長(zhǎng)期保存。
缺點(diǎn):靈敏度差,測(cè)定范圍窄,樣品需要量大,不同的蛋白質(zhì)產(chǎn)生顏色的深淺相近,因此它常用于需要快速,但并不需要十分精確的蛋白質(zhì)測(cè)定。
干擾測(cè)定的物質(zhì)包括有:在性質(zhì)上是氨基酸或肽的緩沖液,如TrIs緩沖液,因?yàn)樗鼈儺a(chǎn)生陽性呈色反應(yīng),銅離子也容易被還原,有時(shí)出現(xiàn)紅色沉淀。
雙縮脲試劑檢測(cè)蛋白質(zhì)原理步驟
雙縮脲試劑的配制取10g氫氧化鈉放入量筒中,加水至100mL,待充分溶解后倒入試劑瓶中,配成質(zhì)量濃度為0.1g/mL的氫氧化鈉溶液,瓶口塞上膠塞,貼上標(biāo)簽,寫上試劑A。
取1g硫酸銅放入量筒中,加水至100mL,待充分溶解后倒入試劑瓶中,配成質(zhì)量濃度為0.01g/mL的硫酸銅溶液(藍(lán)色)。
瓶口塞上膠塞,貼上標(biāo)簽,寫上試劑B。檢測(cè)蛋白質(zhì)的特異性反應(yīng)是與雙縮脲試劑作用,產(chǎn)生紫色反應(yīng)。
蛋白質(zhì)的主要成分
蛋白質(zhì)是由碳、氫、氧、氮等元素構(gòu)成,20種不同的氨基酸通過肽鍵連接而成的大分子化合物。
蛋白質(zhì)是一種大分子化合物,作為人體細(xì)胞和組織的重要部分,參與人體的各種生化反應(yīng),他主要是由碳、氫、氧、氮四種元素構(gòu)成,大部分蛋白質(zhì)還含有硫、磷元素,少部分蛋白質(zhì)也含有鐵、銅、錳等元素。
以上元素按照一定的順序排列就會(huì)形成蛋白質(zhì)的基本單位,也就是氨基酸,而20種不同類型的氨基酸通過肽鍵連接成長(zhǎng)鏈,根據(jù)鏈的排列方式以及長(zhǎng)短的不同,就形成了多種多樣的蛋白質(zhì)。
蛋白質(zhì)的作用包括哪些
蛋白質(zhì)的作用可分為動(dòng)態(tài)功能如催化作用,以及結(jié)構(gòu)功能如構(gòu)成各種組織等。
1、動(dòng)態(tài)功能:包括化學(xué)催化反應(yīng)、物質(zhì)代謝調(diào)控、血液凝固、免疫反應(yīng)、肌肉收縮、基因表達(dá)調(diào)控等。
2、結(jié)構(gòu)功能:可以提供結(jié)締組織、骨的基質(zhì)以及形成組織形態(tài)等。
蛋白質(zhì)是生物體的重要組成成分,也是生命活動(dòng)的基本物質(zhì)基礎(chǔ),并且是生物體中含量最豐富的生物大分子,承擔(dān)著各種各樣的生物學(xué)功能。
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