大家好,小訊來(lái)為大家解答以上的問(wèn)題。細(xì)胞爬片如何固定在載玻片，細(xì)胞爬片這個(gè)很多人還不知道,現(xiàn)在讓我們一起來(lái)看看吧！

1、單位實(shí)驗(yàn)室做過(guò)，小編順便推薦一下細(xì)胞爬片是從上海晶安生物公司買的，實(shí)驗(yàn)效果不錯(cuò).細(xì)胞免疫熒光步驟：1.細(xì)胞爬片；首先是玻片的處理，普通的蓋玻片用砂輪劃成自己要的大小的小方塊，先用洗衣粉洗干凈，用水沖靜烤干，然后泡酸過(guò)夜，撈酸后流水洗凈，烤干，置于器皿中高壓滅菌，然后再烤箱中大約8小時(shí)烤干備用。

2、爬片可以在培養(yǎng)皿 六孔板或24孔板中都可，我選擇在培養(yǎng)皿中爬。

3、一為節(jié)約經(jīng)費(fèi)（培養(yǎng)皿可以重復(fù)利用）二來(lái)覺(jué)得培養(yǎng)皿口大，操作比較方便。

4、培養(yǎng)皿消毒同上，消毒時(shí)記得消兩把鑷子具體操作是：用胰酶消化好細(xì)胞，充分吹打，使之成單細(xì)胞懸液（注意：這一點(diǎn)很重要，關(guān)系到將來(lái)爬出來(lái)片子的質(zhì)量）取出消毒的培養(yǎng)皿，可以先加少量培養(yǎng)基（以使玻片與培養(yǎng)皿緊密接觸），將玻片小心放入擺放其中，然后將單細(xì)胞懸液一滴一滴的滴到玻片上。

5、最后蓋上培養(yǎng)皿置于37度5％CO2的暖箱中培養(yǎng)，根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀況，24小時(shí)或更長(zhǎng)時(shí)間適時(shí)取出爬片。

6、爬片置于37度PBS中洗三次，每次3到5秒鐘，然后在4％多聚甲醛中固定15分鐘，然后再用37度去離子水將甲醛沖干凈，注意手法輕柔，要不然掉片很厲害。

7、同時(shí)操作過(guò)程中注意玻片的正反面，要不然真的是前功盡棄。

8、將做好的爬片置于濾紙上晾干，然后用中性樹膠粘在載玻片上。

9、注意一定要等中性樹膠徹底干了之后才能做后續(xù)實(shí)驗(yàn)，要不然玻片會(huì)掉下來(lái)的，就又是前功盡棄了 做好的細(xì)胞爬片可以放在－20保存?zhèn)溆?，具體能保存多長(zhǎng)時(shí)間不太清楚，當(dāng)然盡量早用。

10、2.4%多聚甲醛固定10min(固定細(xì)胞器用預(yù)冷的70%甲醇+30%丙酮)；3.PBS漂洗5min；4.0.5% Triton 穿孔15min(丙酮固定法不用透化處理)；5.PBS漂洗2次，每次5min；6.1%BSA封閉30min；7.加入1%BSA稀釋的一抗，于37℃雜交2h；8.PBS漂洗2次，每次5min；9.加入1%BSA稀釋的二抗，于37℃雜交1h；10.PBS漂洗2次，每次5min；11.5ug/ml DAPI染色2min；12.抗淬滅封片劑封片。

11、抗淬滅封片劑:2.5% DABCO (w)50mM Tris(pH8.0)90%甘油。

本文到此分享完畢，希望對(duì)大家有所幫助。